(臺灣)行政院衛生署公告：預告「食品中黴菌毒素檢驗方法－多重毒素之檢驗」為食品衛生管理法所定之食品衛生檢驗方法草案(預告終止日 100-12-05)
2011年11月28日 轉載於（臺灣）行政院公報資訊網 |
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| 行政院衛生署公告 |
中華民國100年11月14日 署授食字第1001904018號 |
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主 旨：預告訂定「食品中黴菌毒素檢驗方法－多重毒素之檢驗」，為食品衛生管理法所定之食品衛生檢驗方法。
依 據：行政程序法第一百五十四條第一項。
公告事項：
一、訂定機關：行政院衛生署。
二、訂定依據：食品衛生管理法第二十五條。
三、草案內容如附件。本案另載於本署網站（網址：http://www.doh.gov.tw）之網頁及行政院衛生署食品藥物管理局網站（網址：http://www.fda.gov.tw）之「本局公告」網頁。
四、對於本公告內容有任何意見或修正建議，請於本公告刊登公報之次日起20日內陳述意見或洽詢：
(一) 承辦單位：行政院衛生署食品藥物管理局
(二) 地址：台北市南港區昆陽街161-2號
(三) 電話：
(四) 傳真：
(五) 電子郵件：hanyi@fda.gov.tw
署 長 邱文達
食品中黴菌毒素檢驗方法－多重毒素之檢驗草案
100年11月14日署授食字第1001904018號預告訂定 1 . 適用範圍：本檢驗方法適用於穀類、豆類、核果類等食品及其製品中黃麴毒素B1 （aflatoxin B1）等11品項黴菌毒素（見附表）之檢驗。
2 . 檢驗方法：檢體經萃取及淨化後，以液相層析串聯質譜儀（liquid chromatograph/tandem mass spectrometer, LC/MS/MS）分析之方法。 2.1. 裝置： 2.1.1. 液相層析串聯質譜儀： 2.1.1.1. 離子源：電灑離子化正離子（positive ion electrospray ionization, ESI+）。
2.1.1.2. 層析管：ACQUITY BEH C18，1.7 μm，內徑2.1 mm×10 cm，或同級品。
2.1.2. 旋渦混合器（Vortex mixer）。
2.1.3. 離心機（Centrifuge）：轉速可達3000×g以上者。
2.1.4. 氮氣蒸發裝置（Nitrogen
evaporator）。
2.1.5. 振盪器（Shaker）。
2.2. 試藥：氯化鉀、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、氯化鈉、甲酸及醋酸均採用試藥特級；甲醇、乙腈均採用液相層析級；去離子水（比電阻可達18 MΩ‧cm以上）；黃麴毒素B1等對照用標準品共11品項。
2.3. 器具及材料：
2.3.1. 離心管：50 mL，PP材質。
2.3.2. 容量瓶：10 mL、100 mL及1000 mL，褐色。
2.3.3. 濾膜：孔徑0.22 μm，Nylon材質。
2.3.4. 濾紙：Whatman No.4，直徑11 cm，或同級品。
2.3.5. 玻璃纖維濾紙：Whatman GF/A，直徑11 cm，或同級品。
2.3.6. 塑膠針筒：1 mL及50 mL。
2.3.7. 免疫親和性管柱（Immunoaffinity
column）：Myco
6 in 1TM管柱，或同級品。
2.4. 試劑之調製：
2.4.1. 0.1N鹽酸溶液
取鹽酸9 mL，緩緩加入去離子水500 mL中，再加去離子水使成1000 mL。
2.4.2. 0.1N氫氧化鈉溶液
稱取氫氧化鈉4 g，溶於去離子水使成1000 mL。
2.4.3. 磷酸鹽緩衝溶液
稱取氯化鉀0.2 g、磷酸二氫鉀0.2 g、磷酸氫二鈉2.92 g及氯化鈉8 g，加去離子水900 mL溶解，再以0.1N鹽酸溶液或0.1N氫氧化鈉溶液調整至pH 7.4，並加去離子水使成1000 mL。
2.4.4. 50%乙腈溶液
取乙腈50 mL，加去離子水使成100 mL。
2.4.5. 20%乙腈溶液
取乙腈20 mL，加去離子水使成100 mL。
2.4.6. 含0.5%醋酸之80%甲醇溶液
取醋酸0.5 mL及甲醇80 mL，加去離子水使成100 mL。
2.5. 移動相溶液之配製：
2.5.1. 移動相溶液A
取甲酸1 mL，加去離子水使成1000 mL，以濾膜過濾，取濾液供作移動相溶液A。
2.5.2. 移動相溶液B
取甲酸1 mL，加甲醇使成1000 mL，以濾膜過濾，取濾液供作移動相溶液B。
2.6. 標準溶液之配製：
取黃麴毒素B1、黃麴毒素B2、黃麴毒素G1、黃麴毒素G2、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、玉米赤黴毒素、赭麴毒素A、鐮刀黴菌毒素T-2及鐮刀黴菌毒素HT-2對照用標準品各約1 mg，精確稱定，分別以乙腈溶解；取伏馬毒素B1及伏馬毒素B2各約1 mg，精確稱定，分別以50%乙腈溶液溶解，並定容至10 mL，作為標準原液，貯存於-18℃。臨用時分別取適量標準原液混合，以20%乙腈溶液稀釋至0.5～500 ng/mL，供作標準溶液。
2.7. 檢液之調製：
2.7.1. 萃取
取磨碎混勻之檢體5 g，精確稱定，置於離心管中，加入磷酸鹽緩衝溶液25 mL，振盪60分鐘後，以3000×g離心10分鐘，取上清液17.5 mL，以玻璃纖維濾紙過濾，作為萃取液A，供淨化用。於剩餘之殘渣及萃取液中加入甲醇17.5 mL，振盪60分鐘後，以3000×g離心10分鐘，續以濾紙過濾，取濾液10 mL，以磷酸鹽緩衝溶液定容至100 mL，以玻璃纖維濾紙過濾，作為萃取液B，供淨化用。
2.7.2. 淨化
取2.7.1.節供淨化用之萃取液B 50 mL，緩緩注入免疫親和性管柱（流速控制1～2滴／秒），待萃取液完全通過管柱後，以磷酸鹽緩衝溶液20 mL流洗管柱至完全無甲醇殘留，棄流出液。再取萃取液A 5 mL，注入該管柱（流速控制1～2滴／秒），待萃取液完全通過管柱後，以去離子水10 mL流洗，棄流出液，再以含0.5%醋酸之80%甲醇3 mL沖提（流速控制1～2滴／秒），收集沖提液，經5分鐘後，再以甲醇3 mL沖提（流速控制1～2滴／秒），合併沖提液，於40℃以氮氣吹乾，殘留物以20%乙腈溶液溶解並定容至1 mL，經濾膜過濾，取濾液供作檢液。
2.8. 鑑別試驗及含量測定：
精確量取檢液及標準溶液各10 μL，分別注入液相層析串聯質譜分析儀中，依下列條件進行分析，就檢液與標準溶液所得波峰之滯留時間及多重反應偵測相對離子強度（註）鑑別之，並依下列計算式求出檢體中各黴菌毒素之含量（ppb）：
檢體中各黴菌毒素之含量（ppb）=
C：由標準曲線求得檢液中各黴菌毒素之濃度（ng/mL）
V：檢體最後定容之體積（mL）
M：取樣分析檢體之重量（g）
液相層析串聯質譜分析測定條件：
移動相溶液：A液與B液以下列條件進行梯度分析
移動相流速：0.3 mL/min。
毛細管電壓（Capillary
voltage）：2.5
KV。
離子源溫度（Ion source
temperature）：150℃。
溶媒揮散溫度（Desolvation
temperature）：500℃。
溶媒揮散流速（Desolvation
flow）：1000
L/hr。
偵測模式：多重反應偵測（multiple reaction monitoring, MRM）。偵測離子、進樣錐電壓（cone
voltage）與碰撞能量（collision energy）如附表。
註︰1. 上述測定條件分析不適時，可依所使用之儀器，設定適合之測定條件。
2. 相對離子強度由兩組離子對之波峰面積相除而得（≦100%）。容許範圍如下：
附註：1. 本檢驗方法之檢出限量如附表。
2. 食品中有影響檢驗結果之物質時，應自行探討。
附表 黃麴毒素B1等11品項黴菌毒素之質譜多重反應偵測模式參數及檢出限量
*為定量離子對。 |
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